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    熒光定量PCR(QPCR)

    熒光定量PCR(QPCR)

    品牌:博爾夫
    價格:mRNA100元/樣/基因,miRNA250/樣/基因





    實時熒光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一種在DNA擴增反應中,以熒光化學物質檢測每次聚合酶鏈式反應(PCR)循環后產物總量的方法,是通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。Real-timePCR是在PCR擴增過程中,通過熒光信號,對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數時期,模板的Ct值和該模板的起始拷貝數存在線性關系,所以可以成為定量的依據。



    將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶的鏈式反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時監測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得Ct值,同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數。



    樣本接收→引物合成→提取總RNA→RNA濃度測定→逆轉錄成cdna→熒光定量PCR→數據分析



    擴增完畢后,進入結果分析界面,看CT值、起始拷貝數、標準偏差等,如果是SYBR做的話,再看下溶解曲線。以β-actin為內參照基因,與對照組相比,得到目的基因表達的相對定量值(RQ值),將RQ值用于統計分析。



    1、動植物組織樣本、細胞沉淀、血清(或血漿)、RNA、cDNA等用干冰運輸
    2、細胞樣本可附帶培養基(保證密封,無外漏,無污染),常溫運輸
    3、全血樣本需用EDTA抗凝管4度運輸。



    1、醫學領域:在對病原體的檢測、腫瘤基因的檢測以及藥物的療效考核中發揮了巨大的作用。
    2、基因工程領域:在基因表達、轉基因以及單核苷酸多態性(SNP)及突變分析的研究中提供了強有力的檢測證據。

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